ARC失去增殖和分化为脂肪细胞的能力，并可以通过分泌细胞因子抑制前脂肪细胞（adipose precursors）的增殖和分化能力。Pu.1（又称Spi1）参与了SAT中ARC的发育，体内前脂肪细胞（adipose precursors）中过表达Pu.1可抑制邻近细胞的分化能力。综上，衰老相关的ARC亚群在衰老过程中出现的前脂肪细胞（adipose precursors）数量减少、脂肪生成抑制和SAT损失中发挥关键作用。

敲黑板啦！

1、ARC只出现在衰老过程中的皮下脂肪

2、ARCs分泌促炎性趋化因子，并抑制脂肪生成

3、ARCs抑制邻近前脂肪细胞（Adipogenic precursors）的分化和增殖

4、Pu.1是ARCs细胞发育和表型功能的关键驱动因子

研究结果

1 小鼠SAT中ARCs细胞亚群在衰老中出现

研究人员为了探究10周龄（young）、48周龄（aged）和72周龄（old）的三组小鼠的腹股沟WAT（Inguinal WAT，iWAT）中SVF细胞亚群的异质性，采用了scRNA-seq测序方法进行分析。实验过程中为了防止细胞分选过程中产生的潜在偏差，研究人员在不去除Lin+细胞（CD45+、CD31+和Ter119+，即不去除免疫细胞和内皮细胞）的情况下使用iWAT的总SVF细胞。对每组2只小鼠的iWAT进行scRNA-seq。分析时，利用Partek Flow生成t分布随机邻近嵌入（t-SNE）图。基因表达谱的无监督聚类分析（Unsupervised clustering），表明在年轻小鼠中存在10个细胞簇，而在衰老小鼠中存在11个细胞簇，每个细胞簇均包含500到2500个细胞左右，每个细胞测序得到平均约19万reads（Fig 1A）。并且研究人员还重复了三次scRNA-seq以确保分类的可重复性（Fig S1A）。值得注意的是，这种无偏差的scRNA-seq能够展现出更全面的iWAT细胞中的不同亚群。且研究人员整合Lin+和Lin-亚群获得的整体祖细胞与常规的去除Lin+细胞亚群后进行的测序分析相比，可以更准确的反映iWAT中SVF整体状况。

研究人员通过Fcgr3、Cd79b和Ccl5等免疫细胞标记物确定了Lin+细胞亚群，其包括B细胞、T细胞、巨噬细胞和内皮细胞。脂肪组织中的Lin-细胞亚群含有CD34标记的脂肪祖细胞（adipose progenitor）。在脂肪谱系亚群（adipose lineage populations）中，除了先前发现的3个脂肪祖细胞亚群（MSC、APC和CD142high APC），研究人员还检测到另外3种细胞亚群：脂肪特异性的成脂Fmod+成纤维细胞（AFFs，能分化为脂肪细胞）（Fig S1D）、前脂肪细胞（Preadipocytes）和早期脂肪细胞（Early adipocytes）。研究人员没有在VAT中检测到AFFs（数据未展示），因此其仅存在于SAT中。总之，新检测到的这些前体细胞亚群（precursor populations）可能是由于使用了没有去除Lin+细胞亚群的总SVF。此前针对Lin-亚群的SVF研究（直接排除Lin+细胞亚群）可能会降低细胞亚群内的异质性：即可能会遗漏除了之前已知的特异性标记细胞类群（Fig S1B）。研究人员还发现了新的更特异的脂肪细胞标记物：MSCs和APCs上的Pi15和CD121a、MSCs特异的Gpr1、APCs的Pref-1，CD142high APCs的Ramp1和Aox3，AFFs的Fgf1和Fmod（Fig S1C）。